如何开展 BioAccord 细胞培养基系统适应性测试 - WKB231508

1) 简介

SST 设计用于确保整个 LC-MS 系统在常规使用之前完全可操作。此测试经过专门设计，可使用 Waters 认证的标准品溶液（Vion 测试混标）在 10 分钟内评估严格的质量标准（质量精度、RT 稳定性、峰分离、峰响应重现性和溶剂背景）。这将帮助用户在执行数据采集之前评估 LC-MS 仪器的状态。该方法可以使用质量数和保留时间作为质量标准筛查九种物质，还可以显示和鉴定匹配的碎片，以进一步展示系统的筛查能力。

Waters 建议您定期执行此测试或类似测试，以便保持数据的高可信度。

正离子模式下进样的九种化合物的提取离子流色谱图示例。

2)    清单

• 检查溶剂并灌注 ACQUITY Premier LC 系统和清洗注射器。
• 创建新分析。
• 回到初始条件。
• 进样两次空白样和五次 Vion 测试混标。
• 查看报告以确保系统符合性能标准。

3)    样品前处理

• 将 1 mL 0.1% 甲酸水溶液（流动相 A）转移到 Waters 样品瓶中，制备空白样品，并将其置于样品管理器中的位置 1:A,1。
• 将 Waters 部件号 186008462 Vion 测试混标安瓿瓶中的内容物转移到 Waters 样品瓶中，并将其置于样品管理器中的位置 1:A,2。

4)    详细步骤

1. 检查 ACQUITY Premier UPLC 溶剂瓶，确保有足够体积的流动相。
2. 确保位置 1:A,1 为空白样，位置 1:A,2 为 Vion 测试混标。
3. 确认质量数锁定溶液是否足够（RDa 流路左侧的溶剂瓶）。
4. 打开 UNIFI 软件。
5. 首次执行 SST 时，请导入 UNIFI UEP 文件。
   • 将“SST CCM.uep”文件导入 UNIFI（包含样品列表、分析方法、示例数据和报告模板）。
6. 选择“通过采集新数据创建分析”来创建新分析。
7. 选择“CCM SST 样品列表”。
8. 选择“CCM SST 分析方法”，然后单击“下一步”。
9. 根据实际情况调整分析名称和文件夹，然后单击“下一步”。
10. 选择系统，单击“下一步”，然后单击“完成”。
11. 单击右下角的绿色选择标记图标，打开“仪器系统”侧面板。
12. 在“二元溶剂管理器”中，选择“灌注 A/B 溶剂”，选择开始灌注，然后关闭窗口。
13. 在“样品管理器 FTN”中，选择“灌注注射器”，完成灌注后关闭窗口。
14. 在“概要”中，选择“回到初始条件”。
15. 等待二元溶剂管理器的压差小于 30 psi。
16. 选择要进样的样品列表行。
17. 单击“开始”按钮（请务必选择“处理样品”、“保存结果”、“生成报告”和“保存报告但不打印”）。
18. 采集完成后，查看报告中的“通过”或“失败”。（请参阅示例报告：“CCM SST Report.pdf”）

SST 通过：完成

BioAccord LC-MS 系统已全面运行。对于每种正极性和负极性，五次平行进样的质量精度、RT 稳定性、MS 响应和重现性的质量标准均在预期范围内。分析结果符合以下标准：1). 已标识组分的质量精度在 +/- 5 mDa 以内。2). 观测 RT %RSD 优于 1.00%。3). MS 响应 %RSD 优于 10.0% 4). 正极性磺胺二甲氧嘧啶平均响应大于 5'000 次计数。5). 负极性的磺胺二甲氧嘧啶平均响应大于 1'000 次计数

SST 失败：完成但有错误

在采集新数据之前，用户需要注意 BioAccord LC-MS 系统。对于每个正极性和负极性，五次平行进样的一个或多个质量标准不符合预期结果。在报告的以下页面中将显示未达到通过标准的红色标记。

以下是系统故障排除的一些提示：

1). 质量数错误标记需要进行新的 RDa 检测器设置。
2). 如果观察到 RT %RSD 和 MS 响应值 %RSD 标记，表明色谱系统出现问题。需要检查流路是否渗漏，制备新鲜溶剂并灌注系统。
3). 磺胺二甲氧嘧啶响应的标记表示 RDa 检测器存在灵敏度问题。您可能需要制备新样品或更换带孔圆片。
4). 分析进样列表的限制状态列可以查看导致问题的特定进样

5)    分析方法

 

目的 管理组分
组分名	预期保留时间 (min)	预期中性质量数 (Da)	加合物	化学式	浓度 (µg/mL)
磺胺脒	2.40	214.0524	+H, -H	C7H10N4O2S	5.0
对乙酰氨基酚	3.60	151.0633	+H, -H	C8H9NO2	10.0
缬氨酸-酪氨酸-缬氨酸	3.80	379.2107	+H, -H	C19H29N3O5	2.5
咖啡因*	4.00	194.0804	+H	C8H10N4O2	1.5
亮氨酸脑啡肽	4.60	555.2693	+H, -H	C28H37N5O7	2.5
维拉帕米*	5.70	454.2832	+H	C27H38N2O4	0.2
磺胺二甲氧嘧啶	5.80	310.0736	+H, -H	C12H14N4O4S	1.0
利血平*	5.90	608.2734	+H	C33H40N2O9	0.6
特非那定*	6.50	471.3137	+H	C32H41NO2	0.2
*该化合物在负离子模式下不电离。
目的 缺省含量
添加自定义级别	正	负

 

 

仪器 色谱柱填料	ACQUITY Premier HSS T3 2.1 x 150 mm (186009469)
柱温	40 °C
流速	250 µL/min
流动相 A	含 0.1% 甲酸的水溶液
流动相 B	90% 乙腈 / 10% IPA / 0.1% 甲酸
清洗液	40% 乙腈 / 40% H2O / 20% IPA
清除液	90% H 2 O / 10% 乙腈
密封清洗液	90:10 水/甲醇

 

 

时间 (min)	流速 (mL/min)	组分 A (%)	组分 B (%)	曲线
0.00	0.250	95.0	5.0	初始
0.50	0.250	95.0	5.0	6
7.00	0.250	15.0	85.0	6
7.80	0.250	15.0	85.0	6
8.00	0.250	95.0	5.0	6
10.00	0.250	95.0	5.0	6

 

 

ACQUITY RDa 检测器
模式	“全扫描”或“包括碎片的全扫描”
质量数范围	小分子 (50 – 800 m/z)
极性	正或负
扫描速率	5 Hz
锥孔电压	正离子模式缺省 (30 V)，负离子模式缺省 (40 V)
裂解锥孔电压	自定义 60 V 到 140 V
事件表	0.00 转移至废液 1.00 转移至 MS 8.00 转移至废液
毛细管电压	正离子模式缺省值 (1.50 kV)，负离子模式缺省 (0.80 kV)
脱溶剂气温度	缺省 (550 °C)
智能数据捕获	开
锁定质量数校正模式	标准品

 

 

样品列表设置
样品类型	空白或 QC
运行时间 (min)	10
进样体积 (µL)	0.5
重复次数	1
极性（仪器）	正/负

 

 

峰处理设置 3D 峰检测
低能量强度阈值	1000 计数
目标筛选设置 按保留时间确定目标
启用按保留时间筛选	已启用
使用以下规则识别目标峰	保留时间窗口中的最大值
使用绝对保留时间漂移值	0.5 分钟
目标筛选设置 按质量数确定目标
目标质量数容差	20 ppm
从结构生成预测碎片离子	已启用
碎片离子匹配容差	10.0 mDa
提取质量色谱图	已启用
容差	手动，30 mDa
提取包含所有已标识离子的质量色谱图	已启用
汇总计算
字段	样品类型	分组方式
观测保留时间 (min)	QC	样品位置
MS 响应	QC	样品位置
限值检查
节点	字段名	组分	级别	错误下限	错误上限
组分	质量数误差 (mDa)	全部	全部	-5	5
“概要”字段	观测保留时间 (min):% RSD (%)	全部	全部		1
“概要”字段	MS 响应值:% RSD (%)	全部	正		10
“概要”字段	MS 响应值:% RSD (%)	全部	负		10
“概要”字段	MS 响应值:平均值	磺胺二甲氧嘧啶	正	5000
“概要”字段	MS 响应值:平均值	磺胺二甲氧嘧啶	负	1000

所有限值检查字段的“样品类型”均为 QC