如何测量 LC 系统扩散以进行 SEC 分析 - WKB83286

目的

使用咖啡因样品确定用于体积排阻色谱方法转换和/或故障排除的 LC 系统扩散

环境

• ACQUITY H-Class Bio
• ACQUITY Arc Bio
• Alliance HPLC
• SEC 色谱柱

步骤

1. 将色谱柱替换为零死体积接头 (700002636)。

2. 用 50:50 水/乙腈溶液冲洗所有溶剂管路、清洗管路和灌注管路。

3. 用下列参数创建仪器方法：

• 运行时间为 1 分钟
• 流速为 0.5 mL/min，溶剂 A 为 100%（等度）
• 柱温箱关闭
• 将波长设置为 273 nm，采样速率为 40 pt/s 或更高

4. 进样三次 0.5 µL 流动相空白（50:50 水/乙腈）。
5. 进样五次 0.5 µL 含 0.160 mg/mL 咖啡因的 50:50 水/乙腈溶液（例如，来自 ACQUITY UPLC/UV 检定标准品试剂盒（700002642；溶液 7）的咖啡因）。
6. 要计算扩散：

• 测定 4.4% 峰高处的咖啡因样品的峰宽 (min)。
• 将峰宽乘以流速，确定峰体积 (mL)，然后乘以 1000，确定峰体积 (μL)。

附加信息

可在此处找到 LC 系统扩散对蛋白质 SEC 的影响：https://www.waters.com/waters/library.htm?cid=511436&lid=134996381&locale=en_BE