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如何在 Empower 3 中显示 474 谱图扫描?- WKB16835

环境

  • Empower 3
  • 474 扫描荧光检测器

答案

以下程序适用于 Millennium 软件,也适用于 Empower:

  1. 请注意,扫描成功取决于选择合适的激发以及发射波长。
  2. 发射扫描的开始波长比激发波长高 10 nm。
  3. 扫描包括两个操作,存储以及输出存储的谱图。要进行故障排除,请首先扫描流动相并确认其不存在干扰。之后可以从溶解在同一流动相中的标准样品谱图中减去该扫描谱图。
  4. 使用带有 HPLC 接头的灌注注射器将流动相填充到流动池中,该接头可直接拧入流通池隔板接头。只使用检测器,断开 HPLC 液流。
  5. 按下键盘上的 Scan(扫描)。
  6. 屏幕会显示第一个选项:Em Scan(Em 扫描)。
  7. 要设置扫描参数,请按 End(结束)键。
  8. 点击 edit/enter(编辑/输入),将扫描设置为 STD(如果尚未设置),然后再次点击 edit/enter(编辑/输入)。
  9. 将速度更改为最慢的扫描速度;即在闪烁的提示下,使用上箭头键选择“2”,然后点击 edit/enter(编辑/输入)。
  10. 点击 Monitor(显示器)键返回 Emission Scan(发射扫描)。(如果要进行其它类型的扫描,请使用向上和向下箭头翻阅其它功能。)
  11. 点击 edit/enter(编辑/输入),然后选择内存位置,1-20。
  12. 点击 edit/enter(编辑/输入),然后选择激发波长;使用数字键(不需要 shift 键)。
  13. 点击 edit/enter(编辑/输入),然后点击 next(下一步)开始扫描,使用 Program Run(程序运行)键。在进入 Millennium 之前启动检测器采集扫描数据。如果激发波长为 300 nm,扫描将在 310 nm 处开始。
  14. 进入 Quickset(快速设置)并像往常一样建立仪器和方法集,但不设置流量。
  15. 在 Quickset(快速设置)中,加载方法集并点击设置。对于初始扫描测试,只需启动监视基线。您可能需要调整 Gain(增益)以保持扫描的规模。
  16. 返回检测器输出现在保存的扫描。点击扫描,然后使用向上箭头键选择 scan function 3, emission spectrum out(扫描功能 3 - 发射谱图输出),或者如 474 EM,D.输出所示。
  17. 点击 edit/enter(编辑/输入),选择存储位置,然后再次点击 edit/enter(编辑/输入)。
  18. 您可以更改停止和开始波长,但测试时请将其保持在全范围;本示例为 310-900 nm。点击 edit/enter(编辑/输入)翻页。
  19. 使用 Program run(程序运行)键启动。数据应显示在 Millennium 监视基线上。如果超出刻度,请降低增益设置,重新采集谱图,然后重新输出。
  20. 增益设置正确后,用溶解有活性样品或标准品的流动相进行替换,并重复该过程。然后将流动相谱图与样品谱图进行比较以确认流动相不产生干扰。
  21. 当然,如果结果不令人满意,您需要选择一个新的激发波长并重新开始该过程。
  22. 要存储输出的谱图,请执行零进样并在软件开始采集数据后点击 Run program(运行程序)键。您可以计算波长;扫描从每秒 1 个数据点开始时会有明显显示。

    Millennium 中的扫描时间分钟数 =

    {(900 nm - (激发波长 + 10 nm))/ 30 nm/s} /Millennium 上显示的分钟数

附加信息