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系统受到严重的 PEG 污染或其它污染后,如何使用酸/碱清洁方案清洁 ACQUITY UPLC?- WKB16167

目的

若因为使用了劣质溶剂而导致 ACQUITY UPLC 被 PEG 污染,则背景会一直可见。即使换用高品质溶剂,高灵敏度的质谱仪(如 Vion、Xevo G2-XS 和 Synapt G2-Si)仍会检出 PEG 背景。同时如果使用 BioAccord (RDa) 或 Vion 等分析完整的单克隆抗体,观察到前沿峰,则可以应用此方案。此方案也可用于处理其它污染物。本文将介绍如何按照酸/碱清洁方案清洁 ACQUITY。

环境

  • ACQUITY UPLC
  • ACQUITY UPLC I-Class
  • ACQUITY UPLC H-Class

步骤

  1. 拆下 UPLC 色谱柱并替换为双通。在每个冲洗步骤中,将所有溶剂管路放入每个溶剂瓶中。使用 Critical Clean 玻璃瓶套件(订购手册)。如果沉子已经使用了一段时间,还应同时更换沉子。
  2. 按照下面所述的确切顺序,用溶剂灌注管路 A 和 B 各 5 min。灌注 FTN 60 s 以执行针清洗,为样品进样器设置 40 个循环。创建一个分析或样品列表,进样 20 次仪器正在运行的溶剂(进样量为 10 μL)。运行时间为 1 min,流速为 0.8 mL/min,A1:B1 为 50:50。将 LC 液流引入废液(而不是质谱仪)。如果使用光学检测器(例如 UV 或 PDA),可使液流通过检测器。只需用水冲洗系统,即可去除系统中以前的溶剂,无需进样。
    1. 用水冲洗系统,以去除客户的流动相。
    2. Magic mix;水 - 乙腈 - 甲醇 - IPA 1:1:1:1,含 2%-5% 甲酸
    3. 用水冲洗以去除系统中的酸。
    4. 10% NH4OH 的水溶液(可去除 PEG 和其它聚合物)。
    5. 管路 A1 和 A2 采用 10% NH4OH,B1 和 B2 采用 100% IPA(管路 A 和 B 采用 H 级 10% NH4OH,C 和 D 采用 100% IPA)。这是一种非常强的溶剂组合,可去除 PEG。
    6. 用水冲洗以去除系统中的碱
    7. 100% IPA
    8. 最后用水冲洗
  3. 如果不使用甲醇或 IPA 作为洗脱液,则用新的不锈钢石或钛石 (289002172) 更换旧的沉子。

附加信息

氨水的最终浓度必须为 10%。因此,如果使用 28%-30% 的氨水,则只能稀释 3 倍。由于氨水的气味非常强烈,请在通风橱中进行制备,将溶剂瓶放入仪器时也务必小心操作。

请勿在 M-class 仪器上使用此方案。PeekSil 和硅胶管不能耐受如此高的 pH 值。

步骤 8 时,在将色谱柱和 MS 重新连接回流路之前,请监测水冲洗液的 pH 值以确保其恢复实验室 pH 值。

每周重新制备所有水性流动相,装填前用 Magic Mix(25/25/25/25 水/异丙醇/甲醇/乙腈)或 100% 甲醇或乙腈等有机溶剂冲洗溶剂瓶三次,再用要使用的溶剂冲洗。切勿使流动相溶剂直接加满溶剂瓶,切勿将流动相瓶放入洗碗机。

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