收集适合峰纯度测定的数据的注意事项 - Tip251

目的

在本篇贴文中，我们将开始一个新系列 - 使用 ACQUITY™ PDA 检测器和 ACQUITY QDa™ 质谱检测器测定峰纯度。我们将讨论峰纯度以及收集适合峰纯度测定的数据的注意事项。

环境

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• Empower 每周小贴士 #251

步骤

步骤 1
峰纯度是指光谱纯度或光谱的一致性。峰纯度不是指化学纯度。如果我们从一个峰中提取光谱并将它们归一化，这些光谱会重叠吗？如果会，则峰可能只由一种组分构成。如果无法重叠，则峰由多种组分构成。我们可以使用 ACQUITY PDA 检测器的 UV 光谱（图 1）

 

或 ACQUITY QDa 质谱检测器的 MS 谱图评估峰纯度（图 2）。

 

步骤 2
ACQUITY PDA“仪器方法”中的以下参数在评估峰纯度时至关重要（图 3）。

•    波长范围：从流动相的 UV 截止值以上开始，到涵盖所有吸收区域的波长结束。如果流动相的溶剂或缓冲液在低端吸收，则流动相的吸光度会降低检测器的线性动态范围，原因是吸光度自动复零（图 4）

•    分辨率：1.2 nm 将为您提供最佳的光谱分辨率（图 5）

•    采样速率：选择一个能够在最窄目标峰上提供至少 12 个光谱的速率，15-20 个光谱为最佳。

步骤 3
ACQUITY QDa 质谱检测器“仪器方法”中的以下参数在评估峰纯度时至关重要（图 6）

•    质量数范围：选择合适的范围
•    采样速率：选择一个能够在最窄目标峰上提供 15-20 个光谱的速率。质谱检测器会根据您输入的质量数范围调整仪器方法中的采样速率。这意味着对于较大的质量数范围，软件会自动将采样速率调整为较低的值 - 反之亦然，即对于较小的质量数范围，将调整为更高的采样速率。

步骤 4
根据“最大值图”，使所有峰的吸光度小于 1 AU。原因是：在高吸光度下，由于光度误差，多种效应可能会导致比尔定律的轻微偏差（约 1%）。尽管这种量级的误差对定量的影响微乎其微，但这种影响可能导致光谱不均匀和光谱失真（图 7）。

因此，为了最大限度地减少用于确定峰纯度的谱差计算中的光度误差影响，化合物的最大光谱吸光度应小于 1.0 AU（图 8）。

步骤 5
5% 的线性误差会对峰纯度结果产生很大的影响（图 9）。

附加信息

最终说明：可以使用 Pro 或 QuickStart 界面完成以上步骤。