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Empower 3 PDA:什么是“纯度 1 角度”、“纯度 1 阈值”(如何确定峰纯度)?- WKB85832

环境

  • Empower 3 软件
  • Empower 2 软件
  • Empower
  • 启用了 PDA 选项的项目

答案

★ 什么是纯度测试?
纯度测试将校正峰顶点处的光谱波形和整个峰的光谱波形,并进行比较。
如果峰中间的光谱形状不同,首先应考虑可能与峰光谱波形不同的其它组分与之共洗脱。
这就是确定纯度的方法。


★ 整个峰的纯度
整个峰的纯度由纯度角和阈值角决定。

纯度角:峰各处的光谱与峰顶点光谱之间的夹角的平均值。换句话说,整个峰的纯度可以通过该值确定。
・如果 < 0.2
本方法的检测限约为 0.1-0.2。因此可以得出结论,纯度值低于 0.2 的峰基本上由相同的光谱组分组成。
其测量精度优于目视检查(最大 1 个角度)。
・如果 > 1
尽管可以观察到形状差异,但仅凭纯度角并不判断组分是否与其它光谱组分共洗脱。
这是因为除了其它共洗脱组分之外,谱图中的噪音也可能导致差异。分析低浓度组分时尤其要注意这一点。

阈值角:指示噪音(通过 S/N 比衡量)对整个峰的影响的索引值。通过比较纯度角的值进行评估。
・如果纯度角 < 纯度阈值角
即使纯度角较大,也可以判断表示噪音影响的阈值角范围内没有明显的共洗脱物。
・如果纯度角 > 纯度阈值角
如果纯度角大于表示噪音引起的谱图形状差异的阈值角,则存在超出噪音影响的光谱差异。
具有不同光谱的组分极有可能发生了共洗脱。

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注意事项

1. 纯度角和纯度阈值的值较大
在“纯度角 < 纯度阈值角”的情况下,不存在明显的共洗脱。例如纯度角 = 9.5 时,阈值角 = 10.0。
由于纯度角比阈值角小 0.5,可以确定没有明显的共洗脱,但在某些情况下,差异比较小(小于角度 10.0)的光谱组分也可能发生了共洗脱。
角度为 10 意味着与标准化光谱之间的差异约为 10%,而差异在约 10 以下的光谱组分将无法被检测到。

2. UV/Vis 光谱的特异性低
Empower3 PDA 可以确定光谱之间的差异,而不直接检测化学组分。具体而言,UV/Vis 光谱的波形由化学结构的基本骨架决定,不会因末端烷基而变化。
换句话说,许多组分具有相同的波形,而 Empower3 PDA 可能检测不到这些组分。

3. 共洗脱组分的含量
即使共洗脱组分的含量相同,纯度角值仍有可能大幅变化,具体取决于峰的主要组分与共洗脱组分之间的差异。
如果无法识别共洗脱组分,则无法根据纯度角评估共洗脱组分的含量。

4. 标准品纯度差
如果观察到高纯度标准品的纯度不佳,可能是由以下几个主要原因造成的:
・浓度过高
即使只在部分波长下的吸光度超过 1 AU,也会破坏吸光度线性,导致光谱出现畸变,得到较差的纯度。请降低浓度,确保最大吸收波长处的吸光度不超过 1 AU,然后再次进行测量。
・流动相的背景吸光度高
如果在低波长下流动相的背景吸光度比较大,则该波长下吸光度的线性范围较小,测得的光谱会发生畸变。在这种情况下,请在处理方法的“纯度”选项卡上缩小要计算的波长范围,然后重新处理。或者避开背景吸光度较大的波长,然后重新测量。

5. 光谱差异显著的组分应同时洗脱。
检测不到共洗脱的主要原因是光谱相似、含量极少的组分共洗脱,但即使共洗脱组分的光谱差异很大,也可能无法被检测到。
那就是共洗脱组分均匀地与主要组分峰重叠的情况。
在这种情况下,以相同比率共洗脱的组分在峰基线和峰顶点处与主要组分重叠,而峰基线和峰顶点是判定峰的标准。简而言之,各谱图的波形与两个波形的总和相同,且比率相同。
纯度测试无法检测到这种情况。
在这种情况下,请确认峰顶点波形与标准品光谱是否有区别,以确定是否存在共洗脱。此操作可通过库搜索执行。

附加信息

是否有讨论 Empower 峰纯度的文档?- WKB46540

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