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如何确定系统驻留体积?- WKB50707

目的

确定系统驻留体积,以便从一个系统到另一个系统(方法使用梯度)进行方法转移。(原始系统和目标系统使用相同的测量技术。)

环境

  • ACQUITY UPLC
  • I-Class
  • H-Class
  • 方法转移

步骤

  1. 如有必要,请在系统中添加紫外检测器。
  2. 使用毛细管限流器替换色谱柱。(对于 ACQUITY 系统,限流措施需将最小反压保持在 2000 psi。)
  3. 准备溶剂 A(100% 的 LC/MS 级水)和溶剂 B(含 10 mg/L 咖啡因的 100% LC/MS 级水)。
  4. 将流速指定为 1.00 mL/min。
  5. 初始条件下的溶剂管理器梯度为 100% 溶剂 A。
  6. 5 分钟时的溶剂管理器梯度为 100% 溶剂 A。
  7. 25 分钟时的溶剂管理器梯度为 100% 溶剂 B。
  8. 30 分钟时的溶剂管理器梯度为 100% 溶剂 B。
  9. 指定采集吸光度数据的通道,包括溶剂组分 %B 的曲线。
  10. 将紫外检测器波长设置为 273 nm。
  11. 运行方法。
  12. 在色谱图上执行以下操作:确定实验 t1/2 — 吸光度曲线达到 100% B 对应吸光度值 50% 时的绝对时间。
  13. 在色谱图上执行以下操作:确定设定的 t1/2 — 设定的梯度达到 50% 时的绝对时间。对于指定的梯度,该时间为15 分钟。
  14. 计算驻留体积相关的时间,方法如下:tD = t1/2 实验 - t1/2 设定
  15. 计算驻留体积,方法如下:VD = tD x F,其中 F = 流速,单位为 mL/min。

附加信息

有关其它信息资源,请参阅 Dolan, John W. Gradient Elution, Part IV: Dwell Volume Problems. LCGC North America [Internet]. 2013 Jun。

1. [cited 2018 Oct]; 31(6)。请访问: http://www.chromatographyonline.com/gradient-elution-part-iv-dwell-volume-problems-0