如何确定系统驻留体积？- WKB50707

目的

确定系统驻留体积，以便从一个系统到另一个系统（方法使用梯度）进行方法转移。（原始系统和目标系统使用相同的测量技术。）

环境

• ACQUITY UPLC
• I-Class
• H-Class
• 方法转移

步骤

1. 如有必要，请在系统中添加紫外检测器。
2. 使用毛细管限流器替换色谱柱。（对于 ACQUITY 系统，限流措施需将最小反压保持在 2000 psi。）
3. 准备溶剂 A（100% 的 LC/MS 级水）和溶剂 B（含 10 mg/L 咖啡因的 100% LC/MS 级水）。
4. 将流速指定为 1.00 mL/min。
5. 初始条件下的溶剂管理器梯度为 100% 溶剂 A。
6. 5 分钟时的溶剂管理器梯度为 100％ 溶剂 A。
7. 25 分钟时的溶剂管理器梯度为 100％ 溶剂 B。
8. 30 分钟时的溶剂管理器梯度为 100％ 溶剂 B。
9. 指定采集吸光度数据的通道，包括溶剂组分 %B 的曲线。
10. 将紫外检测器波长设置为 273 nm。
11. 运行方法。
12. 在色谱图上执行以下操作：确定实验 t_1/2 — 吸光度曲线达到 100% B 对应吸光度值 50% 时的绝对时间。
13. 在色谱图上执行以下操作：确定设定的 t_1/2 — 设定的梯度达到 50% 时的绝对时间。对于指定的梯度，该时间为15 分钟。
14. 计算驻留体积相关的时间，方法如下：t_D = t_1/2 实验 - t_1/2 设定
15. 计算驻留体积，方法如下：V_D = t_D x F，其中 F = 流速，单位为 mL/min。

附加信息

有关其它信息资源，请参阅 Dolan, John W. Gradient Elution, Part IV: Dwell Volume Problems. LCGC North America [Internet]. 2013 Jun。

1. [cited 2018 Oct]; 31(6)。请访问： http://www.chromatographyonline.com/gradient-elution-part-iv-dwell-volume-problems-0