使用 C18 色谱柱运行反相法时，如何减少碱性化合物的拖尾？- WKB92122
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环境
- C18 色谱柱
- 反相法
答案
根据您使用的颗粒类型，有不同的选项。请参阅“附加信息”部分。
附加信息
C18 色谱柱出现碱性化合物拖尾的原因是颗粒表面的硅醇基被电离（去质子化，带负电），而弱碱被电离（质子化，带正电）（强碱实际上总是电离态（质子化，带正电））。
以下是基于颗粒类型的一些选项，可有助于减轻拖尾问题：
杂化填料：
亚乙基桥杂化颗粒（BEH）C18（pH 范围 1-12）：
- 低 pH 值流动相（pH 约为 2.0-3.0）可用于中和硅醇基，降低拖尾量。
- 高 pH 值流动相（pH 约为 10.0）可用于中和弱碱并缓解拖尾情况。高 pH 值流动相不能用于中和强碱。
- 离子对试剂可用于阻止表面硅醇基与带正电的碱性分析物之间的阳离子交换机制。
- 水相和有机流动相均可使用 0.1％ 的 TFA（三氟乙酸）。
- TFA 可将 pH 值下调至约 2.0，中和甲硅醇基。
- TFA 还会使离子与带正电荷的碱基上的正电荷电离，从而阻止阳离子交换机制发生。
- PIC（成对离子色谱）试剂可用于阻止阳离子交换机制并减少拖尾。
- 水相和有机流动相均可使用 0.1％ 的 TFA（三氟乙酸）。
表面带电杂化 (CSH) C18（pH 范围 1-11）：
- 通过这种填料，在许多情况下，含 0.1％ 甲酸的低 pH 值流动相（pH 约为 3.0）可减少弱碱和强碱的拖尾。
- 高 pH 值流动相（pH 约为 10.0）可用于中和弱碱并缓解拖尾情况。高 pH 值流动相不能用于中和强碱。
- 该填料电荷的正表面有助于排斥分析物的正电荷，从而可以最大程度减少阳离子交换机制并减少拖尾。
- 在某些情况下，如果使用 0.1％ 甲酸无法充分减少拖尾，则使用 0.05％ 至 0.1％ TFA 的离子对可能会有所帮助。
硅胶基质填料（pH 范围通常为 2.0-8.0）：
- 使用硅胶基质的 C18 时，无法使用高 pH 值流动相中和弱碱（硅胶在 pH 值高于 8.0 时会溶解）。
- 低 pH 值流动相（pH 约为 2.0-3.0）可用于中和硅醇基，降低拖尾量。
- 在水相和有机流动相中使用 0.1％ 甲酸可能会有所帮助。
- 使用其他酸性改性剂。
- 离子对试剂可用于阻止表面硅醇基与带正电的碱性分析物之间的阳离子交换机制。
- 水相和有机流动相均可使用 0.1％ 的 TFA（三氟乙酸）。
- TFA 可将 pH 值下调至约 2.0，中和甲硅醇基。
- TFA 还会使离子与带正电荷的碱基上的正电荷电离，从而阻止阳离子交换机制发生。
- PIC（成对离子色谱）试剂可用于阻止阳离子交换机制并减少拖尾。
- 水相和有机流动相均可使用 0.1％ 的 TFA（三氟乙酸）。
PIC Reagents Care & Use Manual（《PIC 试剂维护和使用手册》）
HPLC Columns Capabilities Brochure（《HPLC 色谱柱功能手册》）
Hybrid Particle Technology: Part 1: XTerra White Paper（《杂化颗粒技术：第 1 部分：XTerra 白皮书》）
id92122, ion pair, TFA, trifluoroacetic acid