为什么新的 C18、C8、C4 色谱柱在运行等度方法或梯度方法时展示的保留时间比相同部件号的旧色谱柱长？- WKB57068

环境

• C18 色谱柱
• 色谱柱比较

答案

与用过的旧 C18 色谱柱相比，新的 C18 色谱柱往往含有更多的 C18 配体和封端基团。

生物分子在新色谱柱上可能会发生更多的非特异性吸附，这可能会导致保留时间略有增加。

附加信息

新的 C18 色谱柱（与相同部件号的旧 C18 色谱柱相比）保留时间更长的原因可能有很多。

其中一个常见原因是用过的旧色谱柱因发生水解而损失了 C18 配体。

色谱柱损失配体后，表面的疏水性会变差。在某些情况下，安装相同部件号的新 C18 色谱柱可能会显著延长保留时间（特别是在旧色谱柱已使用多年的情况下）。

此外，旧色谱柱还可能因为水解而损失封端基团。色谱柱损失封端基团后，会暴露出更多的硅烷醇基团。这会导致旧色谱柱中的颗粒表面极性更强且负电荷增加，进而可能对保留时间和选择性产生极大影响。

如果您正在分析生物分子：重复进样生物分子（如牛血清白蛋白）可能有助于钝化色谱柱，并将分析物在新色谱柱上的非特异性吸附降至最低。