反相色谱柱每次进样之间应重新平衡多少个空色谱柱体积？- WKB49967

环境

• 反相色谱柱
• 重新平衡

答案

5-10 色谱柱体积

附加信息

例如：一个 4.6x150 mm 色谱柱的空色谱柱体积 (pi * r² * L) 等于 2.5 mL。

对于大多数反相色谱柱，建议重新平衡 5 至 10 个色谱柱体积（12.5 至 25 mL）。

首先，如果重新平衡 10 个色谱柱体积，则检查可重现的保留时间。如果看起来可重现，则可以根据需要尝试仅用 9 个色谱柱体积 (22.5 mL) 进行重新平衡。如果看起来不错，则可以尝试仅用 8 个色谱柱体积，依此类推。

与使用过的旧色谱柱相比，全新的反相色谱柱通常需要更多的重新平衡体积。这是因为较旧的色谱柱可能丢失了一些键合的封端基团和/或键合相。结果，较旧的色谱柱可能具有极性更大的颗粒表面。由于较旧的色谱柱颗粒表面极性更大，因此可以用更少的体积重新平衡。颗粒表面残留有不希望残留的有机溶剂。相反，较旧的色谱柱极性更大的粒子表面偏好更高的水含量，这也是为什么可以用较少的体积重新平衡它们的原因。

全新的色谱柱具有完全覆盖的封端基团和键合相。结果，粒子表面将更加非极性化；颗粒表面偏好较高的有机流动相。重新平衡开始时，新色谱柱的颗粒表面不希望像使用过的色谱柱一样很快“放开”较高的有机物含量。这就是为什么可能需要多达 10 个完整的色谱柱体积来重新平衡新的反相色谱柱的原因。

对于体积过小的色谱柱，请谨慎验证重新平衡反相色谱柱的方法。为了在重新平衡后获得最佳的可重现保留时间，建议不仅要验证旧的（使用过的）反相色谱柱需要多少平衡体积，还要将其与新色谱柱平衡体积进行比较。