使用 Protein-Pak Hi Res Q 色谱柱进行 AAV 空衣壳和完整衣壳的应用纪要中的分析，如何获得公式 1 中的响应因子 (RF)？- WKB252955

环境

• 应用纪要
• 腺相关病毒 (AAV)
• 空衣壳和完整衣壳
• 响应因子 (RF)
• Protein-Pak Hi Res Q
• 离子交换
• 阴离子交换色谱
• 荧光检测器 (FLR)
• UV 检测器 (UV)

答案

响应因子是进样等量（浓度）的完整衣壳和空衣壳时，完整衣壳和空衣壳的峰面积比率。

当衣壳中存在 DNA（完整）时，实际 FLR 响应与空衣壳时的 FLR 响应不同，即使空衣壳和完整衣壳的浓度相同。与空衣壳相比，DNA（完整）的存在会导致 FLR 信号发生轻微变化。需要在公式中考虑到这种信号差异。

如果 RF（空衣壳）为 1.3 [完整衣壳为更高响应]，则需要将完整衣壳峰的峰面积除以 1.3 才能将信号归一化。

对于 FLR，RF 应接近 1。

附加信息

有关详细信息，请参阅 Anion-Exchange Chromatography for Determining Empty and Full Capsid Contents in Adeno-Associated Virus（《阴离子交换色谱法测定腺相关病毒的空衣壳和完整衣壳内容物》）中的公式 1。

更多参考资料请参阅使用配备荧光和紫外双重检测器的体积排阻色谱快速测定 AAV 浓度以及以下期刊文章：Wang, C. et al. Developing an Anion Exchange Chromatography (AEX) Assay for Determining Empty and Full Capsid Contents in AAV6.2. Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 2019, 15, 257–263。