液相色谱 (LC) 色谱柱分离度低的常见原因有哪些？- WKB244143

环境

峰拖尾和/或分离度低的常见原因包括（但不限于）：

系统扩散（谱带展宽）太高。
- 进样器和检测器之间的系统体积太大会导致峰变宽，有时还会出现拖尾。
  - 新流通池体积比旧流通池大
  - 新管路体积大于旧管路
进样器和检测器之间的流路连接不良：
- 锥箍深度不正确（过短）导致接头末端出现空隙。
  - 建立新连接。
- 锥箍滑动（管路可能在接头末端内滑动，导致产生空隙）
  - 使用 PEEK 手紧接头时可能发生。
  - 安装新接头。
非特异性结合：
- 蛋白质和酸性分析物可能会吸附到不锈钢表面（阳离子吸附）和颗粒上，也可能会通过疏水或亲水作用吸附上去（取决于颗粒类型）：
  - 使用高浓度分析物进行多次“钝化进样”，使不锈钢和颗粒表面的“活性位点”饱和，从而提高回收率和分离度。
色谱柱上积聚基质组分：
- 样品基质可能会污染色谱柱，在色谱柱进样间积聚。
  - 执行色谱柱清洗步骤。
微生物生长/污染：
- 可能会导致峰拖尾，但更常见后果的是导致峰分裂、分离度降低和高压问题
  - 运行 2.5 µm 和亚 2 µm 颗粒色谱柱时，如果可能，请每 24-48 小时更换一次高含水量流动相。
系统问题（包括但不限于）：
- 系统泵送的流速不正确
- 柱温不正确
- 溶剂混合不正确

Waters 现在提供 MaxPeak Premier 色谱柱，可防止酸性分析物吸附到色谱柱内的不锈钢表面。

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