寡聚核苷酸不再洗脱，进样 20-25 次后，UV 或 MS 检测不到 - WKB243907

故障描述

• 寡聚核苷酸不再洗脱，或无法被 UV 或 MS 检测到
• 三根新色谱柱在同一系统上观察到相同的结果：进样 20-25 次时，色谱柱不再洗脱寡聚核苷酸

环境

• ACQUITY UPLC
• OST
• 寡聚核苷酸
• 金属吸附
• 金属相互作用
• TEA/HFIP

原因

系统组件在流路、进样器或色谱柱上发生非特异性金属吸附

解决方法

1. 使用含 5 mM Na2 EDTA 的 80:20 水/乙腈溶液清洗系统和色谱柱。
2. 将 LC 液流转接到废液流路（Na2 EDTA 可能会抑制 MS 信号）。
3. 向管路 A 和 B 注入清洗溶液，每条管路灌注 6 min。
4. 用 50/50 A/B 溶液以 0.5 mL/min 的流速冲洗色谱柱 20 min。
5. 完成后，应将色谱柱置于 0.5 mL/min 的 50/50 方法缓冲液/乙腈水溶液中 10 min。
6. 将 LC 流路连接到 MS，并在方法的初始条件下平衡色谱柱。

附加信息

如果存在金属，还需要进样 5 mM Na2 EDTA 作为空白样品，以清洗进样器针的内部。需要进行 30 次进样才能钝化针的内部。

可以向样品中添加 0.05 mM - 0.1 mM EDTA，进一步减少样品与金属的相互作用。

寡聚核苷酸色谱方法应包括在每次运行结束时清洗低 pH 流动相，以减少碱性金属加合物在进样之间在固定相上积聚。

有关详细信息，请参阅在寡核苷酸 LC/MS 分析中采用哪种色谱柱清洗步骤可以减少钠加合物？