AccQ•Fluor 和 AccQ•Tag Ultra 试剂如何衍生化氨基酸？ - WKB238328

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环境

AccQ•Fluor
AccQ•Tag
氨基酸分析 (AAA)
衍生化

答案

AccQ•Fluor 和 AccQ.Tag Ultra 试剂以相同的方式衍生化氨基酸，因为这两种试剂盒包含相同的组分。

AccQ•Tag Ultra 方法基于专门为氨基酸分析开发的衍生化试剂。Waters AccQ•Tag Ultra 试剂（6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯，或 AQC）是一种 N-羟基琥珀酰亚胺活化的杂环氨基甲酸酯（一种胺衍生化化合物）。

图 1-1：Waters AccQ•Tag Ultra 试剂

试剂化学品：

AccQ•Tag Ultra 试剂可将初级氨基酸和次级氨基酸转化为稳定的衍生物，如下图所示。所有氨基酸的衍生基团结构都相同，因此具有 UV 吸光度和荧光特性。过量的试剂水解产生 6-氨基喹啉 (AMQ)，一种无干扰的副产物。注：衍生化峰标记在色谱图中，并始终会出现。其大小和含量因批次而异，并随时间变化。由于这种差异，峰的大小在定量上或诊断上都没有显著性。

图 1-2：AccQ•Tag Ultra 反应：

与氨基酸反应：

AccQ•Tag Ultra 试剂与伯氨基酸和仲氨基酸反应迅速，可生成高度稳定的尿素。在防止样品溶剂蒸发的情况下，所得衍生物可在室温下稳定长达一周。

试剂水解：

在较慢的反应中，过量的试剂水解生成 6-氨基喹啉 (AMQ)、N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS) 和二氧化碳（请参阅下图）。过量的试剂会在一分钟之内分解。主要水解产物 AMQ 会产生一个明显的峰，很容易通过色谱分离。而 NHS 和二氧化碳不会干扰分析。

图 1-3：在有水的情况下的 AccQ•Tag Ultra 反应

附加信息

所有 AccQ•Tag 色谱中始终存在衍生化峰 (AMQ)，必须将它与标记的氨基酸分离。

传统用于 HPLC 方法的 AccQ•Tag 使用荧光检测器和相关的 HPLC AccQ•Tag 洗脱液，因此，由于在荧光条件下的响应，AMQ 的峰高较低。

AccQ•Tag 衍生化峰 (AMQ) 对 UV 产生强响应，并且在 ACQUITY UPLC 系统上的 HPLC 和 AccQ•Tag Ultra 方法中可见。