哪些常见原因会导致反相 LC 色谱柱的保留时间高于预期值？ - WKB236458

环境

• C18 色谱柱
• 反相
• 保留性问题
• 保留时间更长

答案

可能受各种因素的影响。请参阅“附加信息”部分。

附加信息

• 全新 C18 色谱柱具有完整的封端覆盖，在某些情况下保留时间更长。
  • 请参阅：为什么新的 C18 色谱柱在运行等度方法或梯度方法时展示的保留时间比相同部件号的旧色谱柱长？
• 柱温箱温度过低：
  • 如果柱温箱无法正常工作，则其温度可能低于预期温度。
  • 较低的温度可能会导致分析物比预期延后洗脱。
  • 使用外部温度计测量柱温箱的实际温度。
• 流速太慢：
  • 如果系统单向阀或泵无法正常工作，或者流路堵塞，则流速可能会比预期的要慢。
  • 流速较慢会导致分析物比预期延后洗脱。
  • 在一段时间内将废液收集到刻度量筒中。确认收集的体积是否为预期体积。
•  梯度比例阀工作不正常：
  • 梯度比例阀 (GPV)（低压混合）可能导致输送的有机相过少或水相过多。
  • 两种情况均可能导致保留时间增加。
• 梯度混合（高压混合）工作不正常：
  • 系统可能未正确混合流动相，这可能会导致输送的有机相过少或水相过多。
  • 两种情况均可能导致保留时间增加。
• 预混合流动相组成不正确：
  • 预混合流动相中的有机物过少（或水性成分过多）会导致保留时间高于预期时间。
• 流动相 pH 不正确。
  • 弱碱性分析物在高于其 pKa 2 个 pH 单位或更高 pH 的条件下进行中和时，保留时间更长。
  • 弱酸性分析物在低于其 pKa 2 个 pH 单位或更低的 pH 值下进行中和时，保留时间更长。
    • 如果无意中在该方法中使用了错误 pH 的流动相可能会导致出现意外的保留问题。
• 较大的系统延迟体积（梯度延迟）：
  • 与具有较小系统延迟体积（梯度延迟）的系统相比，具有较大系统延迟体积（梯度延迟）的系统将显示出更长的保留时间：
    • 请参阅：Dwell Volume (Gradient Delay) and Extra-Column Volume (Bandspread, System Dispersion): What Are They and How Do They Impact Method Transfer（《驻留体积（梯度延迟）和柱外体积（谱带展宽，系统扩散）分别是什么？它们如何影响方法转换？》）
• 单向阀问题：
  • 单向阀粘滞可能导致流动相被泵送回流动相瓶而不是送入流动相液流。
    • 这可能会导致流动相中水相与有机相的比率不正确：
      • 由于单向阀问题，进入流动相的有机物较少时，保留时间较长。
• 系统渗漏：
  • 通过运行动态渗漏测试（或类似测试）检查系统是否有渗漏，确保没有渗漏导致流动相中水相和有机相比率不正确。
• 保留时间长于预期可能还有其他原因，包括流动相老化或流动相改性剂降解。
• 一些预混合的流动相（例如水和异丙醇）会随着时间的推移而分层或分离，水会沉淀在底部，并且保留时间会成比例地增加。（注意：盐浓度越高，分离的可能性越大。乙腈和水可以在较高的盐浓度下分离。）
  • 解决方法：允许系统混合，或在流动相中使用带有搅拌棒的搅拌盘。