哪种色谱柱适合用于寡核苷酸的 HILIC 分析和/或纯化？ - WKB221820

环境

• 最佳柱床密度 (OBD)
• 制备型色谱
• 实验室规模纯化
• 制备色谱柱
• 高效液相色谱 (HPLC)
• 亚乙基桥杂化颗粒 (BEH)
• 亲水作用色谱 (HILIC)
• 寡核苷酸

答案

UPLC：

• ACQUITY Premier BEH Amide (1.7 μm)
• ACQUITY UPLC BEH Amide (1.7 μm)

UHPLC：

• XBridge Premier BEH Amide (2.5 μm)

HPLC：

• XBridge BEH Amide (3.5 μm, 5.0 μm)

制备型（内径可到 30 mm）：

• XBridge BEH Amide (5.0 μm)

附加信息

请参阅：HILIC 可用作在 BioAccord 系统上进行寡核苷酸完整分子量确认的替代分离模式

• 该方法使用 SKU：186009504 - ACQUITY Premier BEH Amide 色谱柱，1.7 µm, 2.1 mm × 50 mm, 1 根/包
• ACQUITY Premier 和 XBridge Premier BEH Amide 色谱柱硬件采用 MaxPeak 高性能表面 (HPS)。此项技术可使色谱柱内的不锈钢表面处于惰性状态。该硬件非常适用于防止寡核苷酸中的磷酸基团吸附到色谱柱内的不锈钢上。

另请参阅：

MaxPeak Premier 色谱柱网页

采用 MaxPeak 高性能表面的 MaxPeak Premier 色谱柱 - 订购信息（文献代码 720007209EN）

注：

BEH Amide 色谱柱可以很好地分离 7-10 kDa (25-30 mer) 的寡核苷酸。（但请参阅下面的注释。）

XBridge BEH Amide OBD 制备色谱柱可用于寡核苷酸的纯化。

例如，XBridge BEH Amide, 130Å, 5 µm, 30 mm X 100 mm（或 50-150 mm 长度）色谱柱可在过载模式下进行数十微摩尔的进样。

但是也存在以下问题：

1. 在 70% 的乙腈溶剂中很难溶解高浓度的寡核苷酸（寡核苷酸沉淀）。寡核苷酸不“喜欢”高有机物含量的溶剂，但在 HILIC 中，需要 ~70% 的乙腈；否则，会出现峰拖尾或样品穿透。
2. 柱头稀释可能可以解决这个问题。请参阅柱头稀释应用纪要，了解柱头稀释的工作原理。
3. 寡核苷酸可在高达 ~20 mer 的情况下成功分离；更长的寡核苷酸在 HILIC 中分离更困难。使用离子对反相分离（如果可以使用）寡核苷酸是更好的选择。
4. 如果您的方法中可以使用离子对试剂，则离子对反相 (IP-RP) LC 总体上是更好的选择。