哪种色谱柱适合用于寡聚核苷酸的 HILIC 分析及纯化？- WKB221820

环境

• 最佳柱床密度 (OBD)
• 制备型色谱
• 实验室规模纯化
• 制备色谱柱
• 高效液相色谱 (HPLC)
• 亚乙基桥杂化颗粒 (BEH)
• 亲水作用色谱 (HILIC)
• 寡聚核苷酸

答案

ACQUITY BEH Amide (UPLC)

XBridge BEH Amide（HPLC 分析型和制备型）

附加信息

BEH Amide 色谱柱可以很好地分离 7-10 kDa (25-30 mer) 的寡聚核苷酸。（但请参阅下面的注释。）

XBridge BEH Amide OBD 制备色谱柱可用于寡聚核苷酸的纯化。

例如，XBridge BEH Amide, 130Å, 5 µm, 30 mm X 100 mm（或 50-150 mm 长度）色谱柱可在过载模式下进行数十微摩尔的进样。

但是也存在以下问题：

1. 在 70% 的乙腈溶剂中很难溶解高浓度的寡聚核苷酸（寡聚核苷酸沉淀）。寡聚核苷酸不“喜欢”高有机物含量的溶剂，但在 HILIC 中，需要 ~70% 的乙腈；否则，会出现峰拖尾或样品穿透。
2. 柱头稀释可能可以解决这个问题。请参阅柱头稀释应用纪要，了解柱头稀释的工作原理。
3. 寡聚核苷酸可在高达 ~20 mer 的情况下成功分离；更长的寡聚核苷酸在 HILIC 中分离更困难。使用离子对反相分离（如果可以使用）寡聚核苷酸是更好的选择。
4. 如果您的方法中可以使用离子对试剂，则离子对反相 (IP-RP) LC 总体上是更好的选择。