LC 色谱柱堵塞、脏污和/或高压问题的常见原因是什么？ - WKB121927

环境

• 色谱柱堵塞
• 反压过高
• 故障诊断排除

答案

色谱柱堵塞导致过早出现高压问题，常见原因包括：

1. 微生物生长/污染（最常见的问题）

2. 流动相中有非生物颗粒

3. 从易损系统部件（例如泵密封件）上脱落的非生物颗粒

4. 样品和/或样品基质沉积在色谱柱上（需要清洗色谱柱）

5. 样品中的颗粒随样品一起进样

6. 分析物不溶于流动相时析出沉淀

7. 如果缓冲盐过快暴露于高有机相中，则会析出沉淀

8. 流速过快（例如，如果色谱柱的内径为 1.0 mm，0.6 mL/min 的流速会导致色谱柱超压）。

9. 可重复使用的接头卷曲/皱缩（如 PEEK 锥箍或内置手紧接头）

 

附加信息

•  如果问题是微生物污染：
  • 由于微生物现已进入填充床中，因此无法正确清洗色谱柱。
    • 如果色谱柱已被微生物污染，则即使进行反向冲洗也无法将色谱柱清洗干净。
      • 要解决此问题，请丢弃溶剂瓶过滤器（吸滤头），对 LC 系统进行清洁（请根据制造商的指导原则进行清洁），然后安装新的吸滤头。
        • 为了降低微生物污染的风险，需要合适的流动相进行处理，包括：
          • 除非瓶中有机物含量至少为 10％，否则应每 24-48 小时更换一次含低摩尔浓度盐的水流动相（例如 10 mM）。如果有机物含量至少为 10％，只要有机物没有大量挥发，则可以每周更换一次。
          • 有关使用 Waters BEH SEC 色谱柱的体积排阻色谱法（SEC 方法），请参阅 Guide to Size-Exclusion Chromatography (SEC) of mAb Aggregates, Monomers, and Fragments（《关于体积排阻色谱法 (SEC) 分析 mAb 聚集体、单体和碎片的指南》）。
            • 请参阅相关视频：是否必须每天更换水性流动相？| Trust your Science（相信科学）7 - 重点介绍微生物生长如何在约 2 天之内污染系统并破坏色谱。
            • 请参阅相关视频：攻击色谱柱会杀死水性流动相细菌！| Trust Your Science（相信科学）18 - 重点介绍绿色激光如何帮助您“看到”流动相中的细菌生长。还展示了微生物污染对 SEC 色谱柱的影响。
• 如果非生物颗粒（来自流动相、仪器、样品等）已堵塞色谱柱：
  • 以 0.1 mL/min 的流速反冲洗色谱柱，液流请冲洗到烧杯中（而不是检测器中），可能可以解决问题。
    • 为防止非生物样品堵塞色谱柱：
      • 粒径小于 3.5 µm 的色谱柱请使用 0.2 µm 过滤器过滤流动相。
      • 粒径 3.5 µm 及更大的色谱柱请使用 0.45 µm 过滤器过滤流动相。
      • 使用柱前在线过滤器或保护柱也可以帮助防止色谱柱被非生物颗粒堵塞。
      • 确定是否在过去 12 个月内进行了仪器预防性维护 (PM)。
        • 泵密封件需要每年更换（有时更频繁），因为密封件会随着时间而磨损，并且可能导致微粒被引入流动相，然后被引入色谱柱的入口筛板。
• 如果样品基质沉积在色谱柱上：
  • 根据色谱柱维护和使用手册，可以使用适当的溶剂清洁色谱柱。
• 如果色谱柱上有沉淀：
  • 可以运行一个很长的缓梯度，以重新溶解沉淀物。