如何平衡新的糖基 BEH Amide 色谱柱 - WKB111759

目的

平衡新的糖基 BEH Amide 色谱柱。

 

环境

• UPLC
• HPLC
• HILIC
• 糖基分析

步骤

为了充分使用新的（未使用的）糖基 BEH Amide 色谱柱，最好在实际测试样品分析之前平衡色谱柱并展示其性能。通过连续进样代表性样品来进行平衡，直至获得稳定的色谱图。

虽然糖基 BEH Amide 色谱柱将使用甲酸铵作为流动相，但首先使用含有 0.1% TFA 的梯度流动相对色谱柱进行首次平衡仍然是有益的。TFA 可有效清除色谱柱固定相的中和以及离子对污染物，否则污染物可能会以离子的形式紧紧地吸附到 HILIC 固定相上，最终导致色谱柱性能变差。

附加信息

如果遇到了唾液酸化糖基的问题，请尝试下述方案，使用胎球蛋白进行平衡。

1. 制备 10 mg/mL 的胎球蛋白溶液：

- 在 1.5 mL 试管中称量 10 mg 胎球蛋白（Sigma F3004 或等效样品）。

- 用 1 mL 18.2 MΩ 的水溶解所有固体化学品。旋涡混合均匀。

- 将胎球蛋白溶液转移至 LC 样品瓶。

2. 平衡方案：

- 在 LC 梯度所用的柱温下，使用初始流动相平衡色谱柱。确保 1 min 内系统压力变化不超过 10 psi。

- 用所需的 LC 梯度在糖基色谱柱上进行水的空白进样。

- 在糖基色谱柱上使用所需的 LC 梯度至少进样三次，每次进样 10 mg/mL 的胎球蛋白溶液。

- 样品进样体积：1 µL

- 现在色谱柱应该已平衡，可以立即使用。