分析低丰度抗体电荷异构体的推荐方法是什么？- WKB106881

环境

• 抗体电荷异构体
• 分离方法
• IEX 色谱柱
• BioResolve SCX mAb

答案

使用 BioResolve SCX mAb 色谱柱进行离子交换，结合荧光检测，可分离低浓度抗体电荷异构体，280 nm 处荧光检测的灵敏度比 UV 吸光度高约 10 倍。

附加信息

使用截留分子量 (MWCO) 过滤器（对于 IgG 大小的蛋白质为 10K）进行预浓缩是一种很好的方法，容错率更高且不易形成蛋白质。MWCO 过滤技术仍然需要研究最佳进样体积，或预稀释浓缩样品以降低 pH 值和离子强度。

IEX 色谱柱可以选择更大的进样体积，但在上样之前，PBS 中的样品需要用水稀释 3 倍或 4 倍（或 10 mM MES，低 pH 值 - 大约 5.5-6）。

这些措施对于确保低丰度电荷异构体分析更高的可重现性是必要的（电荷异构体可以比蛋白质浓度低 5%，可以从 10 µg/mL 开始）。